以下五個(gè)問題 讓你更了解蛋白檢測
點(diǎn)擊次數(shù)：690 更新時(shí)間：2019-08-15
問題一：可以提供哪幾類蛋白樣品？
解答：待檢測的蛋白樣品可以是蛋白溶液、蛋白凍干粉或直接切膠的濕膠塊。對于Western Blotting，在PVDF膜上的蛋白樣品，是無法回收進(jìn)行試驗(yàn)的。
問題二：蛋白樣品如何保存適宜？
解答：蛋白樣品不要像平時(shí)試驗(yàn)一樣，放在緩沖溶液中保存，因?yàn)椴煌木彌_液體系中的無機(jī)鹽成份，會嚴(yán)重干擾蛋白檢測結(jié)果。如切膠后的膠條直接放在EP管中，低溫保存即可。
問題三：如何避免待檢測蛋白的二次污染問題？
解答：很多客戶抱怨蛋白純度無法達(dá)到要求，檢測結(jié)果不理想，并且會出現(xiàn)莫名其妙的角蛋白峰。這是典型的實(shí)驗(yàn)過程中二次污染，這種二次污染源就是我們的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。蛋白質(zhì)譜檢測中的角蛋白峰主要在染膠、脫色、切膠和酶解過程中引入的，其來源包括我們的皮膚屑，頭皮屑，衣物上的動植物蛋白等，因此在試驗(yàn)關(guān)鍵操作過程中，如切膠一定要身穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴手套，口罩和發(fā)套在通風(fēng)櫥中進(jìn)行；洗染膠的容器也需要使用70%的酒精清洗，再使用去離子水沖洗，實(shí)驗(yàn)過程專心致志，做到快速、準(zhǔn)確。
問題四：蛋白濃度偏低，如何濃縮？
解答：可以使用超濾法濃縮，對蛋白性質(zhì)不會有改變，蛋白種類也不容易丟失，但是損耗比較大，甘油和去垢劑等會堵塞濾膜，影響效果；也可以使用凍干法，對樣品進(jìn)行低溫冷凍干燥濃縮；常見的還有沉淀法，該方法容易操作并且方便快捷，但是可能會有部分種類的蛋白無法沉淀導(dǎo)致蛋白種類丟失。
問題五：提供多少蛋白質(zhì)才能滿足實(shí)驗(yàn)要求？
解答：正常情況下，使用考馬斯亮藍(lán)染色能夠看見的點(diǎn)，就有機(jī)會鑒定出來，將蛋白質(zhì)收集后郵寄給鐘鼎生物即可，不同的檢測項(xiàng)目，對蛋白質(zhì)的需要量是不同的，但是為了便于我們操作，請?zhí)峁┳懔康牡鞍祝M量保證濃度大于1mg/ml，蛋白純度大于90%，在條件允許情況下蛋白質(zhì)的量越多越好，單項(xiàng)檢測少不得低于5ug。
